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试剂配制
除杂交液和洗膜液外，所有试剂都用DEPC水配置，所有器皿都在180℃烘8hr或者在双氧水中泡半小时以上,`所有的离心管和PIPET都用新的。
DEPC水
10XMOPS（pH 7.0）
10XMOPS（pH 8.0）
甲酰胺
甲醛
20XSSC
杂交液: 7% SDS,1%BSA, 1mM EDTA, 0.25 M NaHPO4 (pH 7.2)
洗膜液: 0.2XSSC，0.2%SDS
实验步骤
1．电泳RNA定量，RNA上样量为5-10mg。
2．倒胶,将胶在水中加热融化后,冷却到60℃后,加入10xMOPS,和3%甲酰胺，混匀倒胶。[1.95g 琼脂糖溶于110ml DEPC水，加热融化,冷却到60°C后加入15ml 10xMOPS（pH 8.0）,25ml 甲醛（formaldehyde）。]
3．配电泳缓冲液(1000ml):100ml 10xMOPS（pH 7.0）, 800ml DEPC水, 100ml甲醛。
4．配RNA Loading Buffer (1650ml): 200ml 10xMOPS（pH 8.0）, 350ml甲醛, 1000ml 甲酰胺，100ml 常用10X Loading Buffer。
5. 样品RNA: RNA Loading Buffer=1:3，混匀， 68℃放置5min, 冰上放置5min，上样。
6．电泳4-5 hr 至溴酚蓝距上样孔孔6cm。电泳时每隔半小时搅动一次电泳液。
7．将胶在水中洗2次，将需要染色的泳道（Marker）切下,EB(0.5mg/ml)染色,拍照。
5．不染色部分直接在10XSSC中转膜,过夜。转膜装置由下往上：玻璃板，盐桥，绝缘垫片，胶，膜，虑纸，吸水纸。
6．将膜表面吸干（无水渍反光），在紫外交联仪上交联, 80℃烘2小时。膜存放于4℃,备用。
7．55℃杂交液中预杂交1-2小时。
8．加入随机引物法标记的同位素探针，65℃杂交过夜。
9．65℃用洗膜液洗膜15分钟，两次。
10．将杂交膜用保鲜膜封好后于-70℃放射自显影,或压磷屏。
11．膜存放于洗膜液中，4℃保存。
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