|
试剂配制
4.8升丙烯酰胺母液配制
丙烯酰胺 300g
N,N’－亚甲双丙烯酰胺 16g
尿素 600g
10倍TBE 480ml
4升丙烯酰胺母液配制
丙烯酰胺 250g
N,N’－亚甲双丙烯酰胺 13g
尿素 500g
10倍TBE 400ml
实验步骤
一.制胶： （以下所写为配4块胶的用量）
I．加入PAGE母液（6％ PAGE GEL）120ml
1. Urea 14.4g
2 .ddH2O 67.5g
3．10×TBE 12ml
4. 40%丙烯酰胺 18ml
Mix up,solubilize
(实际配成混合母液使用)
注胶前加入：
II．10％过硫酸胺 1.2ml （实际用量可至1.6ml）
III．TEMED 60ul
(加入搅拌后，立即注胶，防止胶凝固)
二.银染
ddH2O 中漂洗一.二次（1－5分钟）
0.1% AgNO3 溶液中染色10分钟 (0.4g for 400ml)
ddH2O中漂洗二次（～1分钟）
NaOH中显色溶液中显色（5～10分钟，以看见清晰条带为止。太久不好） NaOH 6g 四硼酸钠 0.076g 甲醛 1.6ml ddH2O up to 400ml
固定液中固定（自来水中即可）
附试剂和母液
1．40％甲酰胺Stock solution:
38g 甲酰胺
2g N,N’-亚甲双丙烯酰胺
ddH2O UP TO 100ml
(其PH值应不大于7，存于室温，棕色瓶中.注意：甲酰胺是神经毒素，可以通过皮肤吸入，且具有累积性，应通风，手套，面具)
2．10×TBE
Tris-Base: 108g
硼酸： 55g
EDTA(0.5M PH=8.0) 40ml or 7.44g
ddH2O UP to 1000ml
3. 10%过硫酸胺（APS）
过硫酸胺： 1g
ddH2O UP to 10ml
（存于4oC，放置数周也可，用ep管一次性存放）
4．0.1% AgNO3 (0.4g for 400ml)
5. NaOH （for 400ml）
NaOH 6g
四硼酸钠 0.076g
甲醛 1.6ml
ddH2O up to 400ml
6. 固定液
2.5g Na2CO3
ddH2O UP to 400ml
|