新鲜的组织件必须马上进行固定，植物组织一般固定于FAA固定液中。由于需要切片必须进行真空抽气。为了尽量不破坏植物组织内的细胞组成及内含物成份，抽气及放气必须缓慢。经过抽气的植物组织会沉入瓶底，并有空气小泡从组织中冒出。

试剂配制

FAA固定液（100ml），室温保存

配制：无水乙醇      50ml     50％

      冰醋酸         5ml      5％

      37％甲醛      10ml     10％

      水            35ml

封片剂：  50%中性树胶+50%二甲苯

poly-lysine：用蒸馏水溶解，浓度为1mg/ml，溶解后于4℃冰箱保存备用

染色剂：0.05% 甲苯胺蓝： 0.05g溶于100g  ddH2O

实验步骤

1．  第一天所需材料适量（不超过固定液体积的1/20）取到已盛有FAA固定液的青霉素小瓶中。用真空泵缓慢抽气（抽气过程10分钟），在真空状态（>20atm）放置15分钟后，缓慢放气（放气过程10分钟）。可观察到有空气小泡冒出，样品沉到瓶底。室温放置16小时（准确）后开始脱水。

    准备工作：将蜡（Paraplast Plus）在60C融解过夜。

2． 第二天早上9：00，脱水。梯度分别为：50%乙醇（植物组织应该沉在瓶底，说明抽气是充分的），50%乙醇，60%乙醇，70%乙醇，85%乙醇，95%乙醇，100%乙醇，100%乙醇，1/4二甲苯:3/4乙醇，1/2二甲苯:1/2乙醇，3/4二甲苯:1/4乙醇（饱和番红），室温下每级30分钟。90%二甲苯:10%氯仿，90%二甲苯:10%氯仿，90%二甲苯:10%氯仿，室温下每级60分钟。最后将90%二甲苯:10%氯仿装满青霉素小瓶体积的一半。（用90%二甲苯10%氯仿的目的是让蜡片浮起；而100%二甲苯中蜡片会沉底，压伤组织）

3．  将3-5片Plus蜡片（Paraplast Plus）小心投入含1/2体积90%二甲苯10%氯仿和样品的小瓶，并将小瓶放置于已调到42C的HEAT BLOCKER上，大约15分钟后蜡溶解，轻轻摇动小瓶，使溶解的石蜡均匀分布，再加入3-5片蜡片。几次后小瓶渐满，保持30分钟后，将材料用镊子迅速转入已放有融好的Plus蜡片（Paraplast Plus）（在60C的HEAT BLOCKER上）的新青霉素小瓶中，过夜。

第三天，第四天，每天换蜡2-3次，每次间隔大于6-10小时。

准备工作：60C预热Regular蜡片（Paraplast Regular）。

5．  第五天，包埋。将熔好的Regular蜡片（Paraplast Regular）倒入带手套折好的小船中，用烧热的镊子将材料夹到小船内，并摆好位置。待表面的蜡稍凝，将小船迅速浸于已备好的冷水中，放置至少2小时。（此过程可在60C的烤片机上进行）。包埋好的蜡块可用干净容器装好置于4C存放。

玻片清洗与处理：

用洗衣粉水浸玻片半天后，用绸布轻轻檫洗，后用清水冲洗一小时左右。

蒸馏水冲洗，凉干玻片凉干后，观察玻片表面是否清洁，清洁玻片用4ul poly-lysine涂片，后放于42℃烘箱中烘过夜 。

6．打开展片机42℃，预热涂有poly-lysine的处理过的载玻片上的水。先大致修块，再精细修块，切片厚度8-10微米。

7．42℃展片10分钟即可。展片后放入45-50℃的烘箱内的玻片架子上，用一次性手套包好，以免污染。烤片24小时以上（时间越长越好）。

8．脱蜡、染色、脱水

100%二甲苯（20min），100%二甲苯(15min)，1/2二甲苯1/2乙醇(1-5min)，100%乙醇(2min)，100%乙醇(2min)，95%乙醇(1min)，85%乙醇(1min)，70%乙醇(1min)，50%乙醇(1min)，蒸馏水(1min)，甲苯胺蓝（1h），70％乙醇（30s），85％乙醇（30s），95％乙醇（30s），100％乙醇(1min)，100%乙醇（1-2min），二甲苯(3min)，二甲苯（10～30min）

注意：二甲苯和乙醇容易挥发，用一段时间后要更新。

9．封片

从二甲苯中取出载玻片，用适当封片剂滴于玻片上，用盖玻片封片，应注意避免气泡产生。