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农杆菌EHA105感受态细胞的电击转化
发表时间:2012-09-14 阅读次数:1949次

 

(1)调节电击仪,使其电脉冲为25uF,电压为2.5KV,电阻为400Ω
(2)从-70℃冰箱中取出EHA105感受态细胞,置于冰上使其融化.
(3)加1uL质粒于感受态细胞中,轻轻混匀.
(4)将上述菌液和DNA悬液加进电击杯的底部,迅速将电击杯放进电击仪.
(5)按设定的参数,启动对细胞的电脉冲.
(6)电击以后,尽快取出样品,加入1ML无抗YEB培养基.
(7)将上述菌液转入1.5MLdorf管中,28℃ 2小时以上
(8)将菌液涂布在加有相应抗生素的YEB培养基上, 28℃培养2-3天,直至菌落长出.
 
备注:所有操作最好在冰上进行,电击杯电击之前在冰上预冷.
 
 

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