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质粒DNA的小量制备
发表时间:2012-09-14 阅读次数:1328次

 

 

实验步骤
<!--[if !supportLists]-->1.     <!--[endif]-->从平板上挑取含目的质粒DNA的单菌落,接种于3 ml含相应抗生素的LB液体培养基中,37 °C,200 rpm/min,振荡培养过夜。
 
<!--[if !supportLists]-->2.     <!--[endif]-->取出试管,将菌液移至1.5 ml 离心管中,4, 000 r/min,离心5 min,弃上清液,空干。
 
<!--[if !supportLists]-->3.     <!--[endif]-->加入100 µl预冷的溶液I,剧烈震荡,悬浮菌体。
 
<!--[if !supportLists]-->4.     <!--[endif]-->再加入200 µl新配制的溶液II,轻轻混匀,裂解菌体。
 
<!--[if !supportLists]-->5.     <!--[endif]-->然后加入150 µl溶液III,充分混匀后,冰置15 min后取出,12000 r/min,离心10 min,
 
<!--[if !supportLists]-->6.     <!--[endif]-->取上清液用酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)抽提后,吸取上清液加入2倍体积无水乙醇,混匀,-20 °C冰箱中放置2hr后取出,12000 r/min,4 °C,离心10 min,弃上清液,
 
<!--[if !supportLists]-->7.     <!--[endif]-->沉淀用75%乙醇轻轻洗涤,室温晾干后,质粒DNA溶于50 µl含RNase (20 µg/ml)的TE溶液中,37 °C温育30 min后,-20 °C贮存、备用。
 
 

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