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PAGE凝胶电泳及银染
发表时间:2012-09-14 阅读次数:1284次

 

试剂配制
4.8升丙烯酰胺母液配制
丙烯酰胺                            300g
N,N’-亚甲双丙烯酰胺                16g
尿素                                600g
10倍TBE                           480ml
4升丙烯酰胺母液配制
丙烯酰胺                             250g
N,N’-亚甲双丙烯酰胺                 13g
尿素                                 500g
10倍TBE                            400ml
实验步骤
一.制胶: (以下所写为配4块胶的用量)
I.加入PAGE母液(6% PAGE GEL)120ml   
1. Urea                   14.4g
2 .ddH2O                 67.5g
3.10×TBE              12ml
4. 40%丙烯酰胺           18ml
  Mix up,solubilize
(实际配成混合母液使用)
注胶前加入:
II.10%过硫酸胺             1.2ml (实际用量可至1.6ml)
III.TEMED                  60ul
(加入搅拌后,立即注胶,防止胶凝固)
 
 
二.银染
ddH2O 中漂洗一.二次(1-5分钟)
0.1% AgNO3 溶液中染色10分钟      (0.4g for 400ml)
ddH2O中漂洗二次(~1分钟)
NaOH中显色溶液中显色(5~10分钟,以看见清晰条带为止。太久不好)           NaOH  6g   四硼酸钠   0.076g      甲醛   1.6ml    ddH2O up to 400ml
固定液中固定(自来水中即可)
 
附试剂和母液
1.40%甲酰胺Stock solution:
   38g     甲酰胺
   2g       N,N’-亚甲双丙烯酰胺
   ddH2O UP TO 100ml
(其PH值应不大于7,存于室温,棕色瓶中.注意:甲酰胺是神经毒素,可以通过皮肤吸入,且具有累积性,应通风,手套,面具)
2.10×TBE
 Tris-Base:          108g
 硼酸:             55g
 EDTA(0.5M  PH=8.0)    40ml or 7.44g
 ddH2O UP to 1000ml
3. 10%过硫酸胺(APS)
  过硫酸胺:         1g
  ddH2O UP to 10ml
(存于4oC,放置数周也可,用ep管一次性存放)
4.0.1% AgNO3     (0.4g for 400ml)
5. NaOH  (for 400ml)
   NaOH             6g
   四硼酸钠          0.076g
   甲醛              1.6ml
   ddH2O up to 400ml
6. 固定液
   2.5g      Na2CO3
   ddH2O UP to 400ml
 
 

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