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水稻DNA抽提(CTAB法)
发表时间:2012-09-14 阅读次数:1588次

试剂配制
1.1.5xCTAB (1.5% CTAB. 75mM Tric-HCL(PH:8.0) 15mM EDTA(ph:8.0) 1.05M Nacl ).
2.70% 乙醇。
3.1/10 TE.
4.氯仿/异戊醇(24:1)。
5.异丙醇。

实验步骤
水稻叶片的粉碎:取叶片0.1-0.2克(约半片)放到小研钵中,加入适量的液氮,立刻研磨至粉状,装入2ml离心管,暂时保存在-20℃中。
DNA抽提:用移液枪加入700ul100℃的1.5xCTAB溶液于前离心管中,小心混匀后放入65℃水浴摇床,频率为60rpm,20分钟后取出离心管,加入等体积氯仿/异戊醇,猛烈混匀,离心(13000rpm)10分钟,取上清于备好的新管中,(不要混入氯仿),加入900ul无水乙醇,缓慢混匀后,再猛烈混匀,使DNA成团,-20℃放半小时以上。
将析出的DNA离心,13000rpm(10分钟)。去掉上清,将沉淀用1ml70%乙醇清洗一次,离心干燥,溶于200ul 1/10TE或水中,4度冰箱保存。 

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